亲和层析(AFC)是一种基于分子间特异性结合的分离技术。因其高度特异性,该技术常作为捕获步骤,用于从粗提液中高效分离目标分子。其原理是将特定配体固定于层析填料上,当粗提液流经层析柱时,目标分子因与配体发生特异性结合而被吸附。在非特异性结合的杂质被洗去后,通过解吸即可获得纯化的目标分子。
亲和层析的结合与洗脱机制取决于所使用的配体类型。例如,Protein A层析通常通过降低pH实现洗脱;而螯合填料(用于固定金属离子亲和层析,IMAC)则可通过更换金属离子或添加化学修饰剂来改变结合与洗脱特性。
应用特点
亲和层析填料的动态吸附载量(DBC)因配体不同而异,通常数值相对较低。但由于其载量主要贡献于目标产物的结合,原料杂质基本不产生竞争性吸附,因此亲和层析填料特别适用于生产流程中的捕获与中间纯化阶段。
在生物制药领域,Protein A填料是最常用的亲和层析介质。它能特异性结合IgG,目前已成为重组单克隆抗体捕获步骤的标准工艺选择。