疏水作用层析(HIC)是生物分子工艺纯化中的一种有效工具。该技术利用蛋白质表面可及的疏水区域,及其与弱疏水固定相之间的相互作用。通过采用高盐浓度的水相流动相,表面具有疏水性的蛋白质及其他分子会被HIC填料的疏水配基所吸附。盐条件产生的离液效应促使蛋白质与疏水配基结合。通过降低盐浓度即可将蛋白质洗脱,大多数治疗性目标分子会在低盐或无盐缓冲液中被洗脱。由于HIC分离在温和的洗脱条件下进行,通常能保持生物活性。
疏水相互作用层析(HIC)是生物分子工艺纯化中的一种有效工具。该技术利用蛋白质表面可及的疏水区域,及其与弱疏水固定相之间的相互作用。通过采用高盐浓度的水相流动相,表面具有疏水性的蛋白质及其他分子会被HIC填料的疏水配基所吸附。盐条件产生的离液效应促使蛋白质与疏水配基结合。通过降低盐浓度即可将蛋白质洗脱,大多数治疗性目标分子会在低盐或无盐缓冲液中被洗脱。由于HIC分离在温和的洗脱条件下进行,通常能保持生物活性。
应用特点
疏水相互作用层析是离子交换和尺寸排阻层析的优异互补技术,尤其适用于存在蛋白质异构体,或原料杂质与目标产物等电点或分子量相近的情况。当亲和层析无法区分具有相似识别位点的紧密相关蛋白质时,也可利用HIC的选择性差异进行后续分离。